生物学杂志

生物学杂志 ›› 2020, Vol. 37 ›› Issue (6): 33-.doi: 10.3969/j.issn.2095-1736.2020.06.033

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利用CRISPR/Cas9系统构建人HIF-1α基因敲除细胞株

  

  1. 1. 西南医科大学 基础医学院， 泸州 646000; 2. 重庆大学 生物工程学院， 重庆 400000
  • 出版日期:2020-12-18 发布日期:2020-12-21
  • 通讯作者: 王凭青，教授，博士，研究方向为分子生物学与基因工程，E-mail：wang_pq@21cn.com；向远彩，博士，讲师，研究方向为信号转导与基因调控，E-mail：yuancaix@126.com
  • 作者简介:杨芳，助教，硕士，研究方向为分子遗传学，E-mail：yangfangmichelle@sina.com
  • 基金资助:
    西南医科大学校级项目（2018-ZRQN-108）；四川省科技厅项目（2019YJ0482）；泸州市-西南医科大学联合项目（2019LZXNYDZ03）

Construction of human HIF-1α gene knockout cell lines using CRISPR/Cas9 system#br#

  1. 1. School of Basic Medical Sciences, Southwest Medical University, Luzhou 646000, China;2. Bioengineering College, Chongqing University, Chongqing 400000, China
  • Online:2020-12-18 Published:2020-12-21

PDF (PC)

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摘要： 在人源HIF-1α的PAS结构域内设计特异性靶点，构建Cas9-gRNA-HIF-1α敲除质粒，并将其转染至细胞后经嘌呤霉素筛选出21个单克隆细胞株，随后通过酶切、测序分析及下游基因验证等方法检测，最后得到一株特异性敲除HIF-1α的纯合子细胞（H20）。所设计的靶点能够有效地编辑HIF-1α，将为在其他细胞中通过CRISPR/Cas9系统特异性敲除HIF-1α提供方法借鉴。与此同时，也将为后续揭示HIF-1在由正常排卵事件演变成卵巢肿瘤过程中的作用机制奠定基础。

关键词: HIF-1α基因, CRISPR/Cas9, 基因敲除

Abstract: A specific target site obtained at the PAS (Per-ARNT-Sim) domain of human HIF-1α was used to construct a Cas9-gRNA-HIF-1α knockout plasmid. After transfected it into KGN cells, 21 monoclonal cell lines were selected by puromycin, and then determined by enzyme digestion, sequencing analysis and downstream gene verification, and finally obtained a specifically knockout HIF-1α homozygous cells (H20). Collectively, the specific knockout site used in this study can be efficiently target against HIF-1α, which will provide a reference for the specific knockout of HIF-1α in other cells through CRISPR/Cas9 system.

Key words: HIF-1α, CRISPR/Cas9, gene knockout

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