生物学杂志

生物学杂志 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (1): 16-.doi: 10.3969/j.issn.2095-1736.2023.01.009

• 胶原蛋白专题 • 上一篇    下一篇

基于胃蛋白酶耐受性的变性胶原蛋白定量分析方法

陈丽媛1， 梁　杏2， 彭琪惠2， 李奕恒2， 叶春婷2,3， 徐丽明1   

  1. 1. 中国食品药品检定研究院医疗器械检定所 北京 102629； 2. 广州创尔生物技术股份有限公司 
    广州 510700； 3. 广东赤萌医疗科技有限公司 广州 510700
  • 出版日期:2023-02-18 发布日期:2023-02-21
  • 通讯作者: 叶春婷，博士，主要从事胶原蛋白及其相关产品的研究开发、生物功能与安全性评价，以及基因靶向递送，免疫药物检测等，E-mail: Yechunting@trauer.com.cn；徐丽明，博士，研究员，主要从事医疗器械安全性评价研究，E-mail: xuliming@nifdc.org.cn；叶春婷和徐丽明为共同通信作者)
  • 作者简介:陈丽媛，硕士，从事医疗器械生物学评价，E-mail: chenly@nifdc.org.cn；梁杏，本科，从事医疗器械质量技术研究，E-mail: 464923484@qq.com；陈丽媛和梁杏为共同第一作者
  • 基金资助:
    中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金项目（2020C8）

Quantitative analysis of denatured collagen based on pepsin tolerance

CHEN Liyuan1, LIANG Xing2, PENG Qihui2, LI Yiheng2, YE Chunting2,3, XU Liming1   

  1. 1. Institute for Medical Device Control, National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 102629, China;
    2. Guangzhou Trauer Biotechnology Co., Ltd, Guangzhou 510700, China;
    3. Guangdong Trement Medical Technology Co., Ltd, Guangzhou 510700, China
  • Online:2023-02-18 Published:2023-02-21

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摘要： 基于胶原蛋白的蛋白酶耐受性，建立变性胶原蛋白的定量分析方法。制备6组已知含量比的变性/非变性胶原蛋白混合样品，在液态胶原pH值约2.0的条件下，添加胃蛋白酶对样品中的变性胶原蛋白进行酶切，使其成为短肽，胃蛋白酶与胶原蛋白的质量比为1∶5，温度为30 ℃，消化24 h；然后采用NaCl沉淀法（NaCl终浓度为2 mol/L）对样品中的非变性胶原蛋白进行沉淀回收，并通过羟脯氨酸测定法检测其含量比。结果显示，6组样品中非变性胶原蛋白的回收率为89.96%～99.24%，表明本方法可以充分酶解变性胶原蛋白，而非变性胶原蛋白得以沉淀回收，可用于定量分析液态或海绵状、粉末状等酸溶性胶原蛋白原料和产品中变性胶原蛋白的含量比。

关键词: 胶原蛋白, 变性胶原蛋白, 胃蛋白酶耐受性, 定量分析

Abstract: To establish a quantitative method for denatured collagen based on protease tolerance of collagen, 6 groups of denatured/non-denatured collagen samples with known content ratios were prepared，then pepsin was added in the mass ratio of 1∶5 to liquid collagen at pH value of about 2.0, the denatured collagen in the samples was digested at 30 ℃ for 24 h. The non-denatured collagen was recovered by adding sodium chloride solution with final concentration of 2 mol/L. Result showed that the recovery rates of non-denatured collagen in the 6 groups of samples were 89.96%-99.24%, indicating that this method could be used to quantitatively analyze the content ratio of denatured collagen in liquid or sponge, powder and other acid soluble collagen-based raw materials and products.

Key words: collagen, denatured collagen, pepsin tolerance, quantitative analysis

中图分类号: