生物学杂志

生物学杂志 ›› 2020, Vol. 37 ›› Issue (6): 7-.doi: 10.3969/j.issn.2095-1736.2020.06.007

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轮状病毒VP3表达载体pEGFP-VP3的构建、表达及功能研究

  

  1. 中国医学科学院 北京协和医学院 医学生物学研究所 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室, 昆明 650118
  • 出版日期:2020-12-18 发布日期:2020-12-18
  • 通讯作者: 李鸿钧，研究员,长期从事轮状病毒与宿主相互关系等方面研究，E-mail:lihj6912@hotmail.com
  • 作者简介:杜静，硕士，专业方向为轮状病毒分子生物学相关研究，E-mail:dujing0217@hotmail.com
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目（31700154）；中央高校基本科研业务费（3332018161）；云南省重大科技专项（生物医药）（2018ZF006）；中国医学科学院与健康科技创新工程协同创新团队项目（2016-I2M-3-026）；云南省科技计划项目（2016FB034）；云南省应用基础研究计划面上项目（2019FB020）

Construction, expression and function study of rotavirus VP3 expression vector pEGPF-VP3#br#

  1. Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research & Development on Severe Infectious Disease, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Science, Peking Union Medical College, Kunming 650118, China
  • Online:2020-12-18 Published:2020-12-18

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摘要： 通过构建重组表达载体pEGFP-VP3，将pEGFP-VP3转染MA104细胞，观察VP3的表达情况和表达的VP3对轮状病毒复制的作用，进一步评价构建方式是否成功。GFP荧光和Western Blot结果显示，pEGFP-VP3转染MA104细胞48 h，重组蛋白VP3表达量最高。通过RV拷贝数和免疫荧光检测病毒的复制情况，结果均显示重组蛋白VP3可促进病毒复制，为后续更加深入地探究VP3的功能及在轮状病毒复制中的作用提供了实验基础。

关键词: 轮状病毒, 真核表达载体, VP3, 病毒复制, 抗病毒反应

Abstract: The VP3 gene was inserted into the eukaryotic expression vector pEGPF-N2, and further transfected the recombinant plasmid into MA104 cells to observe whether the expressed VP3 has an effect on rotavirus replication. The expression of recombinant protein was detected by immunofluorescence and Western Blot. The expression of VP3 was the strongest at 48 h post transfection in MA104 cells. And the replication of the virus was detected by qRT-PCR and immunofluorescence. The results showed that the recombinant protein VP3 could promote viral replication, which provided an experimental basis for further exploration of the function of VP3 and its role in rotavirus replication.

Key words: rotavirus, eukaryotic expression vector, VP3, virus replication, antiviral response

中图分类号: