生物学杂志

生物学杂志 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (1): 21-.doi: 10.3969/j.issn.2095-1736.2023.01.021

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多聚酸性氨基酸对蛋白质性质的影响

李亚妃1,2,3,4， 武沈阳1,2,3,4， 褚文丹1,2,3,4， 周翠燕1,2,3,4， 施清华5， 李文奇1,2,3,4   

  1. 1. 清华大学 生命科学与医学研究院，北京 100084; 2. 国家蛋白质科学研究（北京）设施清华基地，
    北京 100084; 3. 清华大学 生命科学学院， 北京 100084； 4. 清华大学结构生物学高精尖创新中心，
    北京 100084； 5. 北京市顺义国际学校，北京 101300
  • 出版日期:2023-02-18 发布日期:2023-02-21
  • 通讯作者: 李文奇，博士，高级工程师，研究方向为重组蛋白表达纯化、性质鉴定与分子间相互作用，E-mail: liwenqi@mail.tsinghua.edu.cn
  • 作者简介:李亚妃，硕士，工程师，研究方向为重组蛋白与鉴定，E-mail: liyafei@mail.tsinghua.edu.cn
  • 基金资助:
    北京市结构生物学高精尖创新中心资助项目（20151551402）

Poly acidic amino acids sequence drives variation of protein in hydrodynamic properties

LI Yafei1,2,3,4, WU Shenyang1,2,3,4, CHU Wendan1,2,3,4, ZHOU Cuiyan1,2,3,4,SHI Qinghua5, LI Wenqi1,2,3,4   

  1. 1. Institute of Biomedicine, Tsinghua University, Beijing 100084, China; 2. National Protein Science Facility,
    Beijing 100084, China; 3. School of Life Sciences, Tsinghua University, Beijing 100084, China;
    4. Beijing Advanced Innovation Center for Structural Biology, Tsinghua University, Beijing 100084, China;
    5. International School of Beijing, Beijing 101300, China
  • Online:2023-02-18 Published:2023-02-21

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摘要： 选取碳末端富含酸性氨基酸的拟南芥 SnRK2.6(sucrose non-fermenting1-related protein kinase 2.6)和人源PDI(protein disulfide isomerase)，以及近球形蛋白拟南芥 PYL10 (PYR like protein 10)，分别将重复酸性氨基酸序列添加到SnRK2.6(1-332)、PDI(1-440)、PYL10碳末端，利用大肠杆菌BL21重组表达，经过亲和层析，离子交换层析和分子排阻层析进行纯化，综合利用分析超速离心技术，分子排阻层析技术以及多角度静态光散射技术，研究人为设计的多聚氨基酸末端对蛋白质分子排阻行为，聚合状态和其他水力学性质的影响。结果发现，多聚酸性氨基酸末端虽不影响蛋白质分子的聚合状态，但会明显减少分子排阻色谱中蛋白质的洗脱体积，影响蛋白质分子的斯托克斯半径和轴长比等水力学性质。

关键词: 分析超速离心, 多角度静态光散射, 分子排阻层析, 多聚酸性氨基酸, 水力学性质

Abstract: 选取碳末端富含酸性氨基酸的拟南芥 SnRK2.6(sucrose non-fermenting1-related protein kinase 2.6)和人源PDI(protein disulfide isomerase)，以及近球形蛋白拟南芥 PYL10 (PYR like protein 10)，分别将重复酸性氨基酸序列添加到SnRK2.6(1-332)、PDI(1-440)、PYL10碳末端，利用大肠杆菌BL21重组表达，经过亲和层析，离子交换层析和分子排阻层析进行纯化，综合利用分析超速离心技术，分子排阻层析技术以及多角度静态光散射技术，研究人为设计的多聚氨基酸末端对蛋白质分子排阻行为，聚合状态和其他水力学性质的影响。结果发现，多聚酸性氨基酸末端虽不影响蛋白质分子的聚合状态，但会明显减少分子排阻色谱中蛋白质的洗脱体积，影响蛋白质分子的斯托克斯半径和轴长比等水力学性质。

Key words: analytical ultracentrifugation, static light scattering, size exclusion chromatography, poly acidic amino acids sequence, hydrodynamic property

中图分类号: