生物学杂志 ›› 2020, Vol. 37 ›› Issue (3): 106-.doi: 10.3969/j.issn.2095-1736.2020.03.106
摘要: 通过中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell, CHO)表达系统制备人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA),为HSA及其融合蛋白质药物的制备及功能研究提供依据。首先构建含有目的基因的重组表达质粒pMH3-HSA,通过有限稀释法和Dot blot检测筛选阳性单克隆,随后扩大培养并悬浮驯化,然后运用5 L一次性生物反应器进行高密度放大培养,以无血清培养基B001和F001分别作为基础和流加培养基, 以55 r/min、DO 20%~40%、pH 6.8~7.4、Tm 37 ℃为基础参数进行发酵控制,通过细胞计数、SDS-PAGE、Elisa、Western Blot等实验方法,检测发酵过程中的细胞生长状态以及目标蛋白HSA的表达情况,同时与毕赤酵母表达系统制备的HSA进行比较。结果表明:1)成功构建并筛选出了含外源HSA基因的高表达单克隆CHO细胞株;2)在5 L一次性生物反应器中进行流加培养,HSA的最高产量达180 μg/mL;3)CHO表达系统产物几乎无降解。综合表明HSA蛋白更适合在CHO系统中进行表达,其蛋白完整性优势在该系统中表现得尤为明显。
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