目的 探讨密码子优化的(GGGGS)3对重组人血清白蛋白在毕赤酵母中表达的影响。方法 分别用PCR的方法扩增出HSA和HSA-(GGGGS)3的基因,经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切后与BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切的pPIC9K连接,构建成pPIC9K-HSA与pPIC9K-HSA-(GGGGS)3重组分泌表达载体,转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α后,表达载体分别用SalⅠ线性化后电击转化至毕赤酵母SMD1168感受态细胞中,将阳性转化子进行PCR鉴定并用甲醇诱导表达。结果 SDS-PAGE分析表明rHSA-(GGGGS)3比rHSA的表达量高约170.57%,Western Blotting表明rHSA与rHSA-(GGGGS)3均具有与人血清白蛋白相同的免疫原性。结论 密码子优化的(GGGGS)3可以提高重组人血清白蛋白在毕赤酵母中的表达。
摘要: 目的 探讨密码子优化的(GGGGS)3对重组人血清白蛋白在毕赤酵母中表达的影响。方法 分别用PCR的方法扩增出HSA和HSA-(GGGGS)3的基因,经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切后与BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切的pPIC9K连接,构建成pPIC9K-HSA与pPIC9K-HSA-(GGGGS)3重组分泌表达载体,转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α后,表达载体分别用SalⅠ线性化后电击转化至毕赤酵母SMD1168感受态细胞中,将阳性转化子进行PCR鉴定并用甲醇诱导表达。结果 SDS-PAGE分析表明rHSA-(GGGGS)3比rHSA的表达量高约170.57%,Western Blotting表明rHSA与rHSA-(GGGGS)3均具有与人血清白蛋白相同的免疫原性。结论 密码子优化的(GGGGS)3可以提高重组人血清白蛋白在毕赤酵母中的表达。