密码子优化的(GGGGS)3对重组人血清白蛋白在毕赤酵母中表达的影响
目的 探讨密码子优化的(GGGGS)3对重组人血清白蛋白在毕赤酵母中表达的影响。方法 分别用PCR的方法扩增出HSA和HSA-(GGGGS)3的基因，经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切后与BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切的pPIC9K连接，构建成pPIC9K-HSA与pPIC9K-HSA-(GGGGS)3重组分泌表达载体，转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α后，表达载体分别用SalⅠ线性化后电击转化至毕赤酵母SMD1168感受态细胞中，将阳性转化子进行PCR鉴定并用甲醇诱导表达。结果 SDS-PAGE分析表明rHSA-(GGGGS)3比rHSA的表达量高约170.57%，Western Blotting表明rHSA与rHSA-(GGGGS)3均具有与人血清白蛋白相同的免疫原性。结论 密码子优化的(GGGGS)3可以提高重组人血清白蛋白在毕赤酵母中的表达。
- 1．东南大学附属中大医院 检验科，南京 210009； 2．安徽安科生物工程（集团）股份有限公司，合肥 230088）
- 1.Department of Clinical Laboratory, Zhongda Hospital, Southeast University, Nanjing,210009; 2. Anhui Anke Biotechnology(group) Co.LTD., Hefei,230088
摘要： 目的 探讨密码子优化的(GGGGS)3对重组人血清白蛋白在毕赤酵母中表达的影响。方法 分别用PCR的方法扩增出HSA和HSA-(GGGGS)3的基因，经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切后与BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切的pPIC9K连接，构建成pPIC9K-HSA与pPIC9K-HSA-(GGGGS)3重组分泌表达载体，转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α后，表达载体分别用SalⅠ线性化后电击转化至毕赤酵母SMD1168感受态细胞中，将阳性转化子进行PCR鉴定并用甲醇诱导表达。结果 SDS-PAGE分析表明rHSA-(GGGGS)3比rHSA的表达量高约170.57%，Western Blotting表明rHSA与rHSA-(GGGGS)3均具有与人血清白蛋白相同的免疫原性。结论 密码子优化的(GGGGS)3可以提高重组人血清白蛋白在毕赤酵母中的表达。