摘要:
目的:在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rhKGF-1蛋白;研究其生物学活性,为rhKGF-1蛋白进一步制药提供基础。方法:合成ΔN23 rhKGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rhKGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构建重组表达质粒pET30a-6His-sumo-rhKGF1,转入E.coli BL21(DE3)中,表达融合蛋白。融合蛋白经Ni-NTA纯化后,切除SUMO标签,再经Ni-NTA纯化获得ΔN23 rhKGF-1蛋白。CCK-8法测定其对人永生化表皮细胞(HaCat细胞)的促增殖作用。结果:成功构建pET30a-6His-sumo-rhKGF1表达质粒,测序结果与预期一致。实现了融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,经纯化、酶切获得了ΔN23 rhKGF-1蛋白。制备的ΔN23 rhKGF-1蛋白具有促进HaCat细胞增殖的作用,EC50=6.11ng/ml。
周昭,范清林,宋礼华. 重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究[J]. 生物学杂志.
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