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摘要: 从人血清白蛋白HSA免疫小鼠制备的杂交瘤单克隆抗体细胞中提取总RNA,通过反转录得到cDNA,经RT-PCR的方法扩增出单克隆抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL的DNA编码序列,通过基因重组的方法将鼠源Fab段VH和VL与人源Fab段重链和轻链恒定区进行嵌合,获得人源化嵌合单链抗体(Single-chain Antibody Fragment, scFv),将scFv克隆到构建的表达载体pBY中导入到宿主菌BL21-trxB(DE3)中进行可溶性表达,在摇瓶水平通过对发酵条件进行优化,胞内可溶性表达量达到1.23 g/L,在此基础上进行反应器放大培养,对关键参数进行优化,scFv表达量达到2.49 g/L。通过人源化嵌合抗体的构建表达并完成了小试水平的研究,为进一步开发人源化单链抗体提供了方法和研究基础。