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人-鼠嵌合单链抗体的构建及其在大肠杆菌中的高效可溶性表达和发酵条件优化
- 1．江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，无锡 214122； 2．江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，无锡 214122； 3．江南大学 糖化学与生物技术教育部重点实验室，无锡 214122
Construction of chimeric single-chain antibody efficient soluble expression in Escherichia coli and optimization of fermentation conditions
- 1. National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology; 2. The Key Laboratory of IndustrialBiotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology; 3. The Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry andBiotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China
摘要： 从人血清白蛋白HSA免疫小鼠制备的杂交瘤单克隆抗体细胞中提取总RNA，通过反转录得到cDNA，经RT-PCR的方法扩增出单克隆抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL的DNA编码序列，通过基因重组的方法将鼠源Fab段VH和VL与人源Fab段重链和轻链恒定区进行嵌合，获得人源化嵌合单链抗体（Single-chain Antibody Fragment, scFv），将scFv克隆到构建的表达载体pBY中导入到宿主菌BL21-trxB(DE3)中进行可溶性表达，在摇瓶水平通过对发酵条件进行优化，胞内可溶性表达量达到1.23 g/L，在此基础上进行反应器放大培养，对关键参数进行优化，scFv表达量达到2.49 g/L。通过人源化嵌合抗体的构建表达并完成了小试水平的研究，为进一步开发人源化单链抗体提供了方法和研究基础。