生物学杂志 ›› 2021, Vol. 38 ›› Issue (1): 29-.doi: 10.3969/j.issn.2095-1736.2021.01.029
摘要: 为探讨单纯疱疹病毒-2型(Herpes simplex virus type 2, HSV-2)UL27、UL54基因的重组表达载体shRNA(small hairpin RNA, shRNA)联合干扰对HSV-2复制的影响,将重组质粒表达载体转染HEK293细胞,利用流式细胞术检测重组质粒转染HEK293的效率,实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测UL27、UL54 基因及其蛋白的表达情况。此外,采用TICD50 (50% tissue culture infective dose, TCID50)法和噻唑蓝 (methyl thiazolyl terazolium, MTT) 比色法检测病毒的滴度变化和HEK293细胞的存活率。结果检测显示: UL27 shRNA75+UL54shRNA1081联合干扰组的UL27、UL54基因mRNA的表达抑制率分别为(88.10±1.95)%和(85.53±2.28)%,gB蛋白、ICP27蛋白表达及子代病毒滴度均明显降低,HEK293细胞的存活率为(97.30±2.91)%,与单干扰组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。说明UL27shRNA75和UL54 shRNA1081这两个靶点联合干扰能显著抑制HSV-2在HEK293细胞中复制,为今后的HSV-2多基因的治疗提供研究基础。
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