鲤疱疹病毒3型焦磷酸测序检测方法的建立
- 1． 中国水产科学研究院 珠江水产研究所 农业部渔药创制重点实验室 广东省水产动物免疫技术 重点实验室， 广州 510380； 2．上海海洋大学 水产与生命学院， 上海 201306
Development of pyrosequencing assay for detection of Cyprinid herpesvirus 3
- 1. Pearl River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Key Laboratory of Fishery Drug Development of Ministry of Agriculture, Key Laboratory of Aquatic Animal Immune Technology of Guangdong Province, Guangzhou 510380; 2. College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China
摘要： 为了针对鲤疱疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3）建立一种基于焦磷酸测序技术的高通量、自动化、快速的检测方法，根据CyHV-3 ORF55、ORF79和ORF92基因保守区域设计特异性PCR扩增引物和测序引物，进行PCR扩增筛选扩增效率最高的引物。PCR灵敏性和特异性试验结果显示，针对ORF79设计的引物扩增效率最高，最低检测量为100个拷贝数，且能特异性识别CyHV-3；将PCR产物进行焦磷酸测序，获得的序列经BLAST比对显示与CyHV-3-U、I、J和GZ11分离株一致性均为100%。该检测方法方便快速，适用于出入境口岸大批量样品CyHV-3诊断检测。