生物学杂志 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (1): 27-.doi: 10.3969/j.issn.2095-1736.2023.01.027
李晓彤, 肖君华, 李 凯, 周宇荀
LI Xiaotong, XIAO Junhua, LI Kai, ZHOU Yuxun
摘要: 为了提高蛋白产量,通过密码子优化漆酶基因LAC1,构建pET-32a(+)-LAC1重组载体,并在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达。其酶学性质表明,目的漆酶蛋白分子质量约为65 ku,其活性在55 ℃以下及pH 3.5~5.0时较为稳定,5 mmol/L 的Ca2+、Cu2+、Mg2+对重组漆酶活性具有促进作用,镍柱纯化后漆酶比活力为32.3 U/mg。通过分析重组LAC1漆酶的结构及活性中心,并与其他真菌漆酶进行序列比对,找出其差异性区段,在化学合成该区段DNA片段时,在特定位点掺入任意碱基,从而引入随机突变,构建随机突变文库并对库容量进行测定,通过批量筛选得到1株酶活提升的突变体,同源建模预测其三维结构。结果表明,通过定向突变获得的突变酶共有4处氨基酸发生变化,其酶活性提高约2.3倍。
中图分类号: