生物学杂志

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重组人白细胞介素7在HEK293细胞中稳定分泌表达

  

  1. 1. 西北民族大学 生物工程与技术国家民委重点实验室, 兰州 730030； 2. 甘肃省动物细胞工程技术研究中心, 兰州 730030； 3. 西北民族大学 生命科学与工程学院, 兰州 730030
  • 出版日期:2017-10-18 发布日期:2017-10-18
  • 通讯作者: 冯若飞，高级实验师，硕士生导师，研究方向为分子病毒学，E-mail：frfself@126.com
  • 作者简介:李向茸，助理实验师，研究方向为合成生物学和分子病毒学，E-mail：491753586@qq.com
  • 基金资助:
    教育部“长江学者和创新团队发展计划”项目（IRT13091）； 2015年中央高校基本科研业务费专项（31920150075）；西北民族大学中央高校基本科研业务费专项资金资助研究生项目资助（Yxm2015205）

Stable secretory expression of recombinant human IL-7 in HEK293 cells

  • Online:2017-10-18 Published:2017-10-18

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摘要： 通过构建人白细胞介素7的重组真核表达载体，转染HEK293细胞，实现IL-7在HEK293细胞中的稳定分泌表达，为生产试剂级的IL-7奠定基础。从质粒pLV-CMV-EF1-GP-rIL-7中扩增人IL-7全长基因，并将其构建于pcDNA3.1真核表达载体上。利用脂质体法将重组质粒转染HEK293细胞，经G418筛选及单克隆，获得稳定分泌表达IL-7的HEK293-rIL-7细胞系。成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-rIL-7，并实现IL-7在HEK293细胞上的稳定分泌表达，最终获得了1株表达量较高的细胞株，命名为HEK293-IL7-2G3细胞，培养48 h的细胞上清中IL-7的含量为3.2 ng/mL。为进一步实现人白细胞介素7在哺乳动物细胞中的分泌表达及药物开发奠定基础。

关键词: 白细胞介素7, 转染, 绿色荧光蛋白, 分泌表达

Abstract: The objective of this study was to construct eukaryotic expression vector of human interleukin-7, and make it expressed in HEK293 cells. IL-7 gene was amplified by PCR from the lentivirus expression vector pLV-CMV-EF1-GPL-rIL-7, and then cloned into the pcDNA3.1 vector to construct eukaryotic expression vector pcDNA3.1-rIL-7. The constructed plasmid was transfected into the HEK293 cells via LipofectamineTM 2000 separately and screened by G418 continuously. By G418 screening and monoclonal, stably secreting expression IL-7 cell line HEK293-rIL-7 was obtained, successfully constructed eukaryotic expression vector pcDNA3.1-rIL-7, and expressed in HEK293 cells. By cell cloning, one cell line with high secretory expression was obtained, named HEK293-rIL7-2G3. The content of IL-7 in the supernatant after 48 h was 3.2 ng/mL. 

Key words: IL-7, transfection, green fluorescent protein, secretory expression